Larry Daley (Ben Stiller) é um sonhador de bom coração. Apesar de ser um azarado, Larry sonha que o destino lhe reserva algo grandioso; só não imagina o quão extraordinário pode ser quando aceita um emprego como segurança no Museu de História Natural. Mas durante o turno de Larry começam a acontecer coisas espantosas: índios, gladiadores e "cowboys" ganham vida e começam a travar batalhas épicas. E o próprio T-Rex volta a aguçar as garras e a mostrar porque é considerado o predador mais temido! Durante o caos, a única pessoa a quem Larry pode pedir ajuda é à figura de cera do Presidente Teddy Roosevelt (Robin Williams), que vai ajudar o nosso herói a salvar o Museu.

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